Bom, pelo jeito não atingi muito bem meu objetivo ao tentar elucidar, um pouco que seja, a aplicação da metagenômica em tecnologias favoráveis ao meio ambiente.
Então resolvi procurar um esquema (coisa que deveria ter feito no ultimo post) o mais generalista possível e explicar o passo a passo do processo. Duvidas? Deixe um comentário!
Simplificando:
(do início)
- Isolamento do DNA total da amostra do ambiente.
- Manipulação do DNA (picotagem do DNA extraído)
- Ligação dos fragmentos em vetores de expressão (plasmídios) para inserir em bactérias (transformar) e cultivá-las.(No esquema ele usa um BAC - cromossomo artificial de bactérias, mas é somente um outro tipo de vetor)
- Construção da biblioteca (conjunto de colônias transformadas)
- Análise: diferentes colônias poderão expressar diferentes proteínas(enzimas), dependendo do seu interesse pode adicionar o substrato de sua enzima no meio de cultura (no nosso caso algum composto tóxico na agricultura, por exemplo) e as bactérias que conseguirem degradar esse composto no meio (obviamente produzindo alguma coloração diferente) são aquelas que possuem o gene de interesse.
E aí? Melhorou?
Então resolvi procurar um esquema (coisa que deveria ter feito no ultimo post) o mais generalista possível e explicar o passo a passo do processo. Duvidas? Deixe um comentário!
Simplificando:
(do início)
- Isolamento do DNA total da amostra do ambiente.
- Manipulação do DNA (picotagem do DNA extraído)
- Ligação dos fragmentos em vetores de expressão (plasmídios) para inserir em bactérias (transformar) e cultivá-las.(No esquema ele usa um BAC - cromossomo artificial de bactérias, mas é somente um outro tipo de vetor)
- Construção da biblioteca (conjunto de colônias transformadas)
- Análise: diferentes colônias poderão expressar diferentes proteínas(enzimas), dependendo do seu interesse pode adicionar o substrato de sua enzima no meio de cultura (no nosso caso algum composto tóxico na agricultura, por exemplo) e as bactérias que conseguirem degradar esse composto no meio (obviamente produzindo alguma coloração diferente) são aquelas que possuem o gene de interesse.
E aí? Melhorou?
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